Услуги упаковки GM AAV
- Эффективность и производительность/ Непревзойденное качество и жизнеспособность/ Разнообразные уровни AAV-векторов/ Быстрое выполнение, высокая чистота, улучшенная активность и превосходная безопасность
Быстрая оценка Руководство по производству AAV GOI
Сервис производства GVC AAV
AAV известны как безопасные и эффективные вирусные векторы для генотерапии и задач генного редактирования. Вирусные векторы особенно подходят для передачи генов in vivo. С развитием трёх поколений AAV от AAV1.0, AAV2.0 до AAV3.0 появляется всё больше искусственных серотипов с различной тканевой специфичностью, что позволяет целенаправленно воздействовать на нужные органы.
GVC (GeneMedi Vector Core) имеет несколько уровней AAV-векторов, от исследовательского до клинического, чтобы обеспечить различные уровни для научных и клинических исследований. Производство AAV-векторов GVC эффективно, продуктивно, отличается высоким качеством и полностью надёжно благодаря внедрению передовых технологий, гибких и гладких производственных процессов и строгому контролю качества.
GeneMedi GVC станет идеальным партнером для вашего производства AAV и разработки процессов AAV.
Типы AAV в сервисе GVC
-
Множество серотипов: AAV1, 2, 3b, 4, 5, 6, 7, 8, 9, PHP.eB, PHP.B, PHP.S, rh10, DJ, DJ/8, AAV2.7m8, AAV2-retro, AAV8-1m/2m/3m, AAV2(Y444F), AAV2, AAV6.2FF, AAV-i.e, AAV-BR1, AAV-2i8, AAV-SIG, AAV-VEC, AAV-Myo, Anc80 и др.
-
Одноцепочечные AAV (ssAAV) и самокомплементарные AAV (scAAV)
-
Готовые частицы AAV и индивидуальное производство AAV
Стабильность производства GVC AAV
Рисунок 1: Консистентная платформа для производства AAV с высоким выходом.
Рисунок 2: Стабильность производственных партий различных серотипов AAV
Процессы верхнего и нижнего потока
| Транзиентная тройная трансфекция | Исследовательский уровень-пилот | Исследовательский уровень-стандарт | Уровень, подобный GMP/GMP уровень |
| Тип клетки | Прикреплённый | Прикреплённый | Взвешенный |
| Банк клеток | —— | —— | TBD |
| Без сыворотки | Н | Н | Д |
| Банк плазмид | Н | Н | Д |
| Очистка | Без очистки | Градиент плотности CsCl | Прояснение Тангенциальная фильтрация потока Аффинная хроматография Анион-обменная хроматография (AEX) |
| Диапазон масштабов | 1E+12 GC/~5E+13 GC | 5E+12 GC/~5E+14 GC | TBD |
Аналитическая разработка и контроль качества (AD&QC)
- Общий осмотр (физический осмотр)
- Идентификация
- Содержание и эффективность
- Чистота
- Проверка безопасности
- Примеси
| QC проект | Исследовательский уровень-стандарт | Уровень, подобный GMP/GMP уровень | ||
| Метод | Результат | Метод | Результат | |
| Внешний вид, прозрачность | Световой осмотр | Визуальный осмотр "Прозрачный раствор, без частиц" |
Внешний вид, прозрачность | Визуальный осмотр "Прозрачный раствор, без частиц" |
| Видимые посторонние вещества | —— | —— | Видимые посторонние вещества | Осмотр лампой |
| Нерастворимые частицы | —— | —— | Нерастворимые частицы | Метод светоблокировки |
| pH значение | —— | —— | pH значение | pH метр Продукт-специфичный |
| Осмотическое давление | —— | —— | Осмотическое давление | Криоскопический метод Специфичный для вспомогательных веществ |
| Объем загрузки | —— | —— | Объем загрузки | Волуметрический метод Соответствует требованиям USP/ChP |
| QC проект | Исследовательский уровень-стандарт | Уровень, подобный GMP/GMP уровень | ||
| Метод | Результат | Метод | Результат | |
| Последовательность генома AAV | —— | —— | Анализ карты рестрикционных ферментов | Результат зависит от отсутствия несоответствий |
| —— | —— | Полимеразная цепная реакция (ПЦР) | ||
| —— | —— | Обратная транскрипция-полимеразная цепная реакция (ОТ-ПЦР) | ||
| —— | —— | Определение последовательности нуклеиновых кислот | ||
| Идентификация капсидного белка | SDS-PAGE в сочетании с вестерн-блотом для идентификации капсидного белка VP1/2/3 | VP1: VP2: VP3=1: 1: 10 | SDS-PAGE в сочетании с вестерн-блотом для идентификации капсидного белка VP1/2/3 | VP1: VP2: VP3=1: 1: 10 |
| Идентификация целых вирусных частиц | —— | —— | Структурный анализ, распределение размеров частиц, анализ показателя преломления под электронным микроскопом | Агрегаты-ТЭМ (негативное окрашивание)≤10% |
| QC проект | Исследовательский уровень-стандарт | Уровень, подобный GMP/GMP уровень | ||
| Метод | Результат | Метод | Результат | |
| Титр вирусных частиц (V.P.) | —— | —— | ELISA | Результат отчёта/~1E14 VP/ml |
| Геномный титр (V.G.) | QPCR | Титр, обнаруженный методом Q-PCR, ≥ количества по протоколу | ddPCR | Результат отчёта/~1-5E13 VG/mL |
| Общий белок | —— | —— | BCA | Результат отчёта |
| Экспрессия белка (Клетка) | —— | —— | ELISA/FIX | TBD |
| Инфекционный титр (I.P.) | —— | —— | TCID50 | Результат отчёта/1-5E11 TCID50/ml |
| Специфическая активность | —— | —— | Специфическая активность = титр генома/инфекционный титр | <100 |
| Эффективность - Геномная экспрессия | —— | —— | Обнаружение экспрессии мРНК или белка клеток in vitro на основе qPCR, ELISA и вестерн-блота | Содержание активности UV 0.8-1.2 mg/mL |
| Эффективность-активность | —— | —— | Биофункциональный анализ | Эффективность in vitro - (между 1-15) vg/клетка |
| QC проект | Исследовательский уровень-стандарт | Уровень, подобный GMP/GMP уровень | ||
| Метод | Результат | Метод | Результат | |
| Тест чистоты капсидного белка | SDS-PAGE электрофорез в сочетании с серебряным окрашиванием | SDS-PAGE ≥95%, VP1: VP2: VP3=1:1:10, явных загрязнений не обнаружено. | SDS-PAGE электрофорез в сочетании с серебряным окрашиванием | SDS-PAGE ≥95%, VP1: VP2: VP3=1:1:10, явных загрязнений не обнаружено. |
| Обнаружение пустых оболочек | —— | —— | ddPCR/ ELISA | Результат отчёта |
| —— | —— | Трансмиссионный электронный микроскоп (ТЭМ) | Результат отчёта | |
| —— | —— | Аналитическое ультрацентрифугирование (AUC) | Результат отчёта | |
| Обнаружение агрегации генома | —— | —— | Высокоэффективная жидкостная хроматография с размерным исключением (SEC-HPLC метод) | Результат отчёта |
| QC проект | Исследовательский уровень-стандарт | Уровень, подобный GMP/GMP уровень | ||
| Метод | Результат | Метод | Результат | |
| Репликационно-компетентный адено-ассоциированный вирус (rcAAV) является важным показателем оценки безопасности продукта. | —— | —— | Иммуноблотинг ДНК (южный блот) и qPCR | qPCR Отрицательный |
| Тест на стерильность | Мембранная фильтрация | Нет роста | Мембранная фильтрация | Нет роста |
| Тест на бактериальные эндотоксины | Реактив лимулюс | TBD | Реактив лимулюс | LAL тест<10 EU/ml |
| Микоплазма | Метод культуры и ПЦР метод | TBD | Метод культуры и ПЦР метод | Отрицательный |
| Экзогенные факторы | —— | —— | Культура | Отрицательный |
| Бионагрузка | —— | —— | Культура | Результат отчёта |
| Проверка на аномальную токсичность | —— | —— | Эксперимент на животных | Соответствует требованиям ChP |
| QC проект | Исследовательский уровень-стандарт | Уровень, подобный GMP/GMP уровень | ||
| Метод | Результат | Метод | Результат | |
| Остатки вспомогательной ДНК плазмид | —— | —— | ddPCR/qPCR | ≤50ng/ml |
| Остатки ДНК клеток-хозяев | —— | —— | ddPCR/qPCR | ≤50 ng/ml |
| Остатки ДНК E1A/E1B (копии/доза) | —— | —— | ddPCR/qPCR | ≤(5-10) x 10^4 копий/мл E1A; (5-10) x 10^4 копий/мл E1B |
| Остатки белка клеток-хозяев | —— | —— | ELISA | ≤0.5ug/10E^12/мл |
| Остатки бычьего сывороточного альбумина | —— | —— | ELISA | ≤50ng/ml |
| Остатки бензоназы | —— | —— | ELISA | ≤10 ng/ml |
| Остатки, связанные с конкретными процессами (такие как йодиксанол, трансфекционные реагенты, аффинные лиганды, Твин 20, детергенты TritonX100 и др.) | —— | —— | HPLC | Результат отчёта |
Рабочий процесс производства AAV
О GVC
GVC (GM Vector Core) - это уникальная платформа GeneMedi для разработки и производства вирусных векторов QbD. В GVC наша основная специализация заключается в индивидуальном производстве вирусных векторов, включая адено-ассоциированный вирус (AAV), лентивирус, аденовирус и VLP.
Наши современные производственные мощности оснащены для масштабного производства, что обеспечивает высококачественное производство вирусных векторов для удовлетворения как исследовательских, так и терапевтических нужд. Наша экспертная команда специализируется на разработке процессов, используя инновационные технологии и обширные отраслевые знания для предоставления клиентам индивидуальных решений, превосходящих ожидания.
GVC станет идеальным партнером для учёных и медицинских специалистов, ищущих надёжные и эффективные услуги по производству вирусных векторов.
Эффективность аффинной очистки AAV
Рисунок 3. Аффинная очистка AAV5: эффективность колонки аффинной хроматографии AAV очень высокая.
Рисунок 4. Серебряное окрашивание: чистота после аффинной хроматографии AAV5/AAV8/AAV2 высокая.
Таблица 1: ddPCR обнаруживает титр по сравнению с Thermo Scientific™ POROS™ CaptureSelect AAVX: скорость восстановления аффинной хроматографии AAV сопоставима.
Улучшение активности AAV
Рисунок 5. Активность AAV. Результаты WB показывают, что сверхэкспрессированные вирусы могут значительно увеличить содержание белка
Рисунок 6. Экспрессия EGFP на основе различных серотипов AAV в мышечных и лёгочных тканях мышей
Пример исследования 1: AAV-опосредованная UROC1-RNAi в гиппокампе мыши
В новаторском исследовании векторы AAV от GeneMedi использовались для доставки UROC1-RNAi в гиппокамп мыши, демонстрируя важную роль наших продуктов в продвижении исследований в области нейронауки. Это применение подчеркивает точность и эффективность наших векторов AAV в таргетировании определённых областей мозга, открывая новые возможности для изучения и лечения неврологических состояний.
Рисунок 6. Уровень флуоресценции при внутримышечной инъекции серотипов AAV (4 недели). RC1, RC5, RC6 и PHP. s инфекция самые лучшие, с видимой флуоресценцией в тканях; DJ, PHP Ярче под флуоресцентным микроскопом B; Все остальные серотипы имеют различные степени инфекционного эффекта, но они намного слабее, чем упомянутые шесть.
Пример исследования 2: Разработка экспрессионного вектора AAV, специфичного для сердца
Наши возможности по оптимизации кассеты AAV демонстрируются через разработку экспрессионного вектора, специфичного для сердца, подчёркивая наш индивидуальный подход к генной терапии. Этот успех подчеркивает наш опыт в оптимизации промотора, позволяя точно контролировать экспрессию генов в целевых тканях, что важно для терапевтического успеха и специфичности.
Пример исследования 3: Лучшая тканевая специфичность инженерного вектора AAV от G-Next™
Инженерные векторы AAV от платформы GeneMedi G-Next™ демонстрируют превосходную тканевую специфичность, подчеркивая наше инновационное преимущество в дизайне векторов. Этот прогресс улучшает точность доставки генов в определённые ткани, снижает внецелевые эффекты и увеличивает терапевтический потенциал генной терапии. Наша приверженность инновациям и качеству подчеркивает роль GeneMedi как лидера в области генной терапии, продвигая возможности персонализированной медицины.
Цитирование и публикации
| Цитирование и публикации |
Facebook
LinkedIn
Twitter
